I cellekultureksperimenter bruges pipetter meget ofte, og nøjagtigheden af deres drift påvirker direkte pålideligheden og gentageligheden af eksperimentelle resultater. Følgende er nogle tip til pipette -drift i cellekultur, som jeg håber vil være nyttigt til dit eksperiment.
1. Vælg den rigtige pipette og tip
- Valg af pipette: Vælg den rigtige pipette i henhold til mængden af væske, der skal overføres. Det normale driftsvolumenområde for de fleste pipetter er 10-100% af det angivne interval. Forsøg at undgå at indstille volumen af en pipette til mindre end 10% af det maksimale volumen, og brug en lille rækkevidde pipette til småvolumen-pipettering.
- Tipvalg: Vælg et tip, der matcher pipetten, og sørg for, at spidsen er tæt indsat for at undgå luftlækage. Derudover skal der vælges til specifikke eksperimenter (såsom aseptisk drift).
2. skyl spidsen
Skyl spidsen 2-3 gange for at danne en homogen film i spidsen og derved forbedre nøjagtigheden af pipettering. Derudover kan det neutralisere kapillæreffekten i mikropipetter, hvilket kan gøre temperaturen inde i spidsen i overensstemmelse med prøvetemperaturen for storvolumen-pipetting. Det skal bemærkes, at skylning kan have en negativ indvirkning på resultaterne, når der pipetter varme og kolde løsninger.
3. Kontroller hastigheden på aspiration og dispensering
- Glat tryk: Tryk og frigør kontrolknappen glat og kontinuerligt i stedet for at trykke på og frigive den pludselig. Dette kan undgå dannelsen af bobler og forbedre nøjagtigheden af pipettering.
- Pause: Efter at have aspireret væsken, skal du lade spidsen være i væsken i ca. 1 sekund, især for disse viskøse væsker. Umiddelbart at trække spidsen kan resultere i ufuldstændig flydende aspiration.
4. Vær opmærksom på spidsens nedsænkningsdybde
- Micropipette: Tipet skal nedsænkes 2-3 mm.
- Pipette i stor rækkevidde: nedsænkningsdybden skal være 5-6 mm. Hvis spidsen er nedsænket for dyb, komprimeres luften inde i spidsen, hvilket får for meget væske til at blive aspireret. Væske, der er tilbage på overfladen af spidsen, kan også påvirke resultaterne.
5. Lodret drift
Dyber pipetten i prøven så lodret som muligt, fortrinsvis uden at afvige fra den lodrette position med mere end 20 grader. Ud over at forbedre nøjagtigheden af pipetvolumen kan dette også forhindre, at væsken strømmer ind i pipetten på grund af overdreven hældning.
6. Overhold pipettspidsen
Når du forbereder sig på at udlede væsken, skal du være opmærksom på, om der er overskydende dråber fastgjort til overfladen af pipettespidsen. Efter afladning af væsken kan spidsen af pipettspidsen røres til siden af beholderen for at sikre, at udladningen er grundig nok til at forhindre, at den sidste dråbe væske forbliver på spidsen af pipettspidsen.
7. Vælg den relevante pipetteringsmetode
- Positiv sugemetode: Velegnet til de fleste væsker. Når du suger væske, skal du trykke på knappen til det første stoppunkt, og slip derefter langsomt knappen for at vende tilbage til udgangspunktet. Tryk derefter på knappen til det første stoppunkt for at udlede væsken, pause et stykke tid og fortsæt med at trykke på knappen til det andet stoppunkt for at sprænge den resterende væske. Slip endelig knappen.
- Baglæns sugemetode: Velegnet til stærkt viskøse væsker, biologisk aktive væsker, let skummende væsker eller ekstremt små mængder væsker. Sug først mere væske ind end det indstillede interval, og blæser ikke den resterende væske ud, når væsken overføres.
8. Hold pipetten ren og vedligeholdt
- Regelmæssig kalibrering: Efter brug af pipetten i en periode skal den kalibreres for at sikre dens nøjagtighed.
- Rengøring: Efter hver brug skal pipetten rengøres i tide for at undgå resterende væske fra at forurene det næste eksperiment.
9. Aseptisk operation
I cellekultur er aseptisk operation meget vigtig. Når du bruger en pipette, skal du være opmærksom på følgende punkter:
- Desinfektion: Før brug, tør pipetten og spidsen med en alkoholbomuldskugle til desinfektion.
- Undgå krydskontaminering: Brug et nyt tip til hver prøve for at undgå krydskontaminering.
Med ovenstående tip kan du bruge pipetter til cellekultureksperimenter mere nøjagtigt og effektivt og forbedre pålideligheden og gentageligheden af eksperimentelle resultater. Jeg håber, at disse tip hjælper dig!